溫泉度假娛樂場所溫泉水軍團菌污染狀況及相關因素調查

  1.調查對象:2005年8一9月選擇溫泉池在30個以上的北京市昌平區內昌平鎮北溫泉度假村(昌平北)、昌平鎮西溫泉旅游公司(昌平西)、昌平東部溫泉度假娛樂山莊(昌平東1)、昌平東部溫泉娛樂宮(昌平東2)4所溫泉度假娛樂場所作為調查對象。

 

  2.調查方法與內容:經過培訓的調查人員按調查表內容進行開業年限、溫泉水加熱、過濾、消毒方式、消毒劑的使用情況、環境條件、溫泉水循環方式、補換新水及溫泉的不同形式進行現場調查,同時用計量檢定所檢定合格的溫度計、酸度計測量水溫和pH值,用余氯比色計測定余氯。樣品用無菌采水瓶采集出井后儲罐水8份、低溫池(34一39℃)水42份、高溫池(40一47℃)水37份共87份,進行軍團菌分離、鑒定和菌落計數。

 

  3.檢測方法:取300ml溫泉水用過濾膜過濾后30ml蒸餾水洗脫,按照1:1比例進行酸處理,取處理液各0.1ml分別涂布在2個GVPC平板,放COZ溫箱37℃培養7d,每天觀察菌落生長情況,挑取可疑軍團菌的菌落轉種在BCYE平板進行分純培養和血平板進行鑒別培養,血平板不生長而BCYE平板生長,用分型血清進行軍團菌分型,另外計數2個GVPC平板的菌落取均值,計算出軍團菌的濃度(CFU/ml),最后用PCR方法鑒定嗜肺軍團菌或非嗜肺軍團菌。

 

  4.菌株分離:軍團菌分離用GVPC和BCYE培養基購于北京路橋技術有限責任公司;標準菌株來源于北京市疾病預防控制中心;軍團菌分型血清(1一14型)來自中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所。

 

  結果

 

  對象與方法

 

  1.調查對象:2005年8一9月選擇溫泉池在30

 

  個以上的北京市昌平區內昌平鎮北溫泉度假村(昌平北)、昌平鎮西溫泉旅游公司(昌平西)、昌平東部溫泉度假娛樂山莊(昌平東1)、昌平東部溫泉娛樂宮(昌平東2)4所溫泉度假娛樂場所作為調查對象。

 

  2.調查方法與內容:經過培訓的調查人員按調

 

  查表內容進行開業年限、溫泉水加熱、過濾、消毒方式、消毒劑的使用情況、環境條件、溫泉水循環方式、補換新水及溫泉的不同形式進行現場調查,同時用計量檢定所檢定合格的溫度計、酸度計測量水溫和pH值,用余氯比色計測定余氯。樣品用無菌采水瓶采集出井后儲罐水8份、低溫池(34一39℃)水42份、高溫池(40一47℃)水37份共87份,進行軍團菌分離、鑒定和菌落計數。

 

  3.檢測方法:取300ml溫泉水用過濾膜過濾后30ml蒸餾水洗脫,按照1:1比例進行酸處理,取處理液各0.1ml分別涂布在2個GVPC平板,放COZ溫箱37℃培養7d,每天觀察菌落生長情況,挑取可疑軍團菌的菌落轉種在BCYE平板進行分純培養和血平板進行鑒別培養,血平板不生長而BCYE平板生長,用分型血清進行軍團菌分型,另外計數2個GVPC平板的菌落取均值,計算出軍團菌的濃度(CFU/ml),最后用PCR方法鑒定嗜肺軍團菌或非嗜肺軍團菌。

 

  4.菌株分離:軍團菌分離用GVPC和BCYE培養基購于北京路橋技術有限責任公司;標準菌株來源于北京市疾病預防控制中心;軍團菌分型血清(1一14型)來自中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所。miP基因特異性引物Lpmip一15幾GCAATGTCAACAGCAA一3’;LpmiP一25‘一CATAGCGTCTTGCATG一3’參照文獻「l,2〕,PCR試劑TaqDNApolymerase購自華美公司。

 

  1.軍團菌檢出情況及血清分型:87份溫泉水檢

 

  出47株軍團菌,檢出率為54.02%。其中昌平北一所溫泉度假村檢出率最高為84.38%;昌平西一所溫泉旅游公司檢出率為48.00%;昌平東兩所溫泉度假娛樂場所檢出率分別為37.50%和14.29%。4所溫泉度假娛樂場所儲罐內溫泉水未檢出軍團菌。47株軍團菌用miP基因進行嗜肺軍團菌(LegionellapneomoPhila,Lp)及非嗜肺軍團菌分型,全部為Lp。

 

  血清分型分出4個型別:Lpl、Lps、Lp6、Lp12。其中最多為Lpl占57.45%,Lp6占21.28%,Lp12占89%,Lps占6.38%。

 

  2.溫泉不同區域的軍團菌菌落計數:溫泉池的溫泉水軍團菌菌落數毛10CFU/ml的有n份,高低溫泉池分別為6、5份;20份n一100CFUZml高低溫泉池水分別為6、14份;>100CFU/ml的有16份中高溫池7份,低溫池9份。

 

  3.Lp血清型別與水溫度關系:4所溫泉度假娛

 

  樂場所溫泉水溫在26一47℃之間。其中低溫池42份水樣檢出Lp26株,檢出率為61.90%;高溫池37份水樣檢出Lp21株,檢出率56.75%;經統計學處理(丫=0.22,尸>0.05),高溫池與低溫池Lp檢出率的差異無統計學意義;儲罐內水溫在26一40℃之間共8份水樣,均未檢出軍團菌。檢出的47株Lp,其中27株Lpl型的溫度范圍在34一44℃;10株Lp6型的溫度范圍在38一44℃;Lps型在39℃檢出1株,44℃時檢出2株;Lp12型的溫度范圍36一42℃。34℃以下和44℃以上都未檢出Lp。

 

  4.影響因素與軍團菌的關系:影響因素包括娛樂場所開業時間、溫泉水pH值、環境條件、溫泉水加熱方式以及消毒方式。4所溫泉度假娛樂場所開業時間最短2年,最長10年。昌平北溫泉度假娛樂場所開業4年,軍團菌檢出率高達84.38%,菌落計數>100CFU/ml有n份;開業10年的昌平東2溫泉度假娛樂場所軍團菌檢出率較低(14.29%),菌落計數為零。溫泉水pH值6.4一7.3,環境溫度26一28℃,但相對濕度比較大均在56%以上。電加熱是溫泉水保持溫度主要方式,鍋爐燒蒸汽加熱只有一家。溫泉場所的消毒全部采用氯制劑,有余氯檢測記錄,采樣時現場測定3家場所余氯含量均在0.3一0.5mg/L之間,但加氯制劑的方式不一樣,用氯制劑刷池而沒有進一步做溫泉水消毒的溫泉度假娛樂場所軍團菌檢出率高,軍團菌菌落計數也高;而一家用鍋爐燒蒸汽加熱余氯含量0.5mg/I曰,其檢出率低。